食用油中苯并（a）芘（BaP）ELISA检测试剂盒使用说明书
检测限：1.5μg/kg 定量区间：2-20μg/kg
本产品可以采用单点定标，即点1个标准品实现定量分析，最大可实现47个样本的检测。采用单点定标时，数据分析请来电索取专门的Excel数据分析软件
1. 样本前处理（动植物性食用油脂，如菜籽油、大豆油、花生油、玉米油、调和油等）
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需要但未提供的试剂和器皿如下： |
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(1) 二氯甲烷，分析纯 |
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(2) 正己烷，分析纯 |
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(3) 甲醇，分析纯 |
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(4) 去离子水 |
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(5) 5mL圆底或锥底玻璃离心管 |
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(6) 2ml玻璃进样瓶或者5ml圆底玻璃试管（一次性） |
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(7) 5mL有机玻璃离心管架（24孔），1个 |
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(8) 17*17*10cm瓷盘，1个 |
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试剂配制 |
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预处理试剂：取1管试剂A，加入到1瓶试剂B中，剧烈震荡使其完全溶解，备用【配制好的预处理试剂呈白色半透明状，于2-8℃保存有效期10天】 |
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1.1预处理 |
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1）称取0.4±0.005g油样于5mL玻璃离心管中，加入0.4mL 预处理试剂混匀； |
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2）室温静置5min（离心管斜躺在桌面上） |
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3）加入0.4mL去离子水、1mL正己烷剧烈振荡2min；静置分层约1min（此时可以先活化柱子） |
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1.2过SPE柱 |
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1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷过柱 |
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3）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL试剂C淋洗，最后吹空气3s； |
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4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃进样瓶中 |
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5）浓缩及复溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇涡旋15s；取0.1mL甲醇复溶液，再加入 |
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0.1mL样本稀释液涡旋15s |
2. 操作步骤
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实验前，请将检测试剂盒从2-8℃冰箱中取出，于室内温度20-28℃下平衡1小时！ |
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1）取出平衡后的适量板条，其余放回铝膜袋中； |
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2）依次：加50μL标准品/样本于相应微孔中；加50μL酶结合物和50μL抗体至所有微孔； |
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3）盖上板贴，于20-28℃下，孵育20分钟；倒出微孔中液体； |
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4）将洗涤液注满微孔浸泡15s倒出，重复2次； |
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5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分钟； |
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6）加100μL终止液至微孔中，于450/630nm波长下，读数 |
3. 结果分析
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1）结合率计算公式 |
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其中， B：为i样本或浓度点的结合率； |
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Ai：为i样本或浓度点的吸光度； |
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A0：为零标准孔的吸光度； |
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2）建立标准曲线：以标准品浓度的对数为x轴，以其对应的结合率B的logit值为y轴，进行线性拟合 |
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建立标准曲线。将样本结合率（计算见1）中公式）代入曲线方程，即可求出样本中苯并（α）芘的含量。 |
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3）超出检测上限的样本稀释方法 |
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① 将样本前处理步骤“1.2过SPE柱-5）”中0.1mL甲醇复溶液用无水甲醇稀释5倍； |
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② 将①的溶液，参照说明书采用样稀稀释后点样； |
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③ 将得出的含量再乘以5，即为最终样本中苯并（α）芘的含量； |
4. 注意事项、常见问题分析及解决办法
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1）注意事项 |
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n 不同产品、不同批次之间试剂不得混用； |
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n 吸取不同试剂，要更换吸头，以免造成试剂污染； |
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n 底物变为蓝色，表示已污染变质或过期，不得使用； |
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n 终止液中含盐酸，使用时防止接触皮肤，如不小心溅到，及时用大量流水冲洗，严 |
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重时请及时就医； |
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n 苯并（α）芘为致癌物，使用标准品、阳性样本，须在通风橱内进行操作，并 |
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穿长袖实验服，戴手套和口罩； |
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