二恶英检测试剂盒

Dioxin ELISA Test Kit

PN530037

注意：在使用前请认真阅读说明书（请以英文为准，中文仅供参考）

1、概述

二恶英检测试剂盒利用竞争性酶联免疫原理。适用于定量或定性检测水样、土壤、泥沙或鱼虾产品中二恶英的含量。其他样品的提取步骤请与我公司联系。如果有必要阳性样品可以通过HPLC, GC/MS或其他的传统方法证实测定结果。

2、安全说明

底物中含有四甲基联苯胺。终止液也含有稀硫酸。要避免皮肤和粘膜与终止液接触。如果不小心接触了请用大量的水冲洗。

3、储存和稳定性

二恶英检测试剂盒应该保存在4–8°C。在使用之前试剂盒中的试剂要恢复到室温。试剂盒在有效期内可以使用。

4、原理

Abraxis二恶英检测试剂盒的原理是间接接竞争酶联免疫反应。通过特异性抗体来识别二恶英。样品中二恶英和包被在板底部的二恶英类似物同时竞争性跟二恶英抗体结合位点结合。洗板，加入酶标记二抗，与结合在底部的抗原抗体复合物结合。洗板，加入底物显色剂发生显色反应；样品中的二恶英浓度与显现出的蓝色的深度成反比。加入反应终止液终止反应。在450nm波长进行检测，通过做标准曲线计算每个样品中二恶英的含量。

5、二恶英检测试剂盒的限制和可能的干扰

样品中的很多易出现的有机物和无机物已经被检测表明对试剂盒的检测没有干扰。然而由于样品中化合物的多变性引起的基质效应是不可能完全避免的。在使用的过程中出现失误也会影响结果，比如：试剂盒保存条件不对、错误的加液顺序、试剂的量没有加准确、孵育的时间太长或太短、孵育的温度太高或太低（低于10°C或高于30°C）。和其它检测方法一样对阳性结果要求通过其它传统的方法来验证。

6、二恶英检测的重要性

多氯二苯并-对-二恶英polychlorinated dibenzo-p-dioxin简称PCDDs）和多氯二苯并呋喃 polychlorinated dibenzofuran（简称PCDFs）作为环境污染物威胁人类的健康。这种污染物是高毒性的，能导致人类肝脏损害，影响生殖系统和发育。二恶英有75种异构体多氯代二苯 (PCDD)和 135种异构体多氯二苯并呋喃 (PCDF)，其中2,3,7,8-四氯代二苯-并-对二恶英（2,3,7,8-TCDD）是迄今为止人类已知的毒性的污染物，国际上常把各同类物折算成相当于2,3,7,8-TCDD的量来表示，称为毒性当量（Toxic Equivalent Quangtity，简称TEQ）。为此引入毒性当量因子（Toxic Equivalency Factor，简称TEF）的概念，即将某PCDDs/PCDFs的毒性与2,3,7,8-TCDD的毒性相比得到的系数。二恶英的检测作为衡量环境污染的指标是很重要的。检测这些大分子混合物是很复杂且昂贵的事情，需要花费大量的时间，昂贵的仪器和复杂的净化装置，气象色谱是检测方法，但是检测样品较少，成本很高。ABR二恶英ELISA检测方法提供了简单高效低成本的检测方法。

工作指导

A 试剂盒组成

1、96孔酶标板：包被有二恶英类似物，1块（12条×8孔）。

2、二恶英标准品:6瓶，浓度分别为0, 2.5, 5, 10, 25和50ppt

3、二恶英抗体

4、二恶英酶标记二抗

5、5×浓缩洗液

6、底物显色液（TMB）

7、终止液

8、稀释液：50%二甲基亚砜水溶液，0.01% Triton X-100(用于调节样品稀释倍数)

B、检测准备

微量移液器和吸头是必须使用的，推荐使用排枪来添加结合物、抗体、底物和终止液，这样可以保证整个酶标板的孵育时间一致。在做同一次测试时要使用同一个盒子里的试剂和标准。

1、使用前将所有的试剂拿到室温（19℃-25℃）。

2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。置于4-8℃保存。

3、标准液，抗体，底物，终止液不用稀释直接使用。

4、以1：5的比例稀释洗液（如果要使用一整瓶那么100ml洗液+ 400ml蒸馏水或无离子水）。

5、由于终止液中包含酸，拿的时候要小心。

C、检测步骤

使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。

1、在对应的玻璃管中加入125μL标准和样品。在每个玻璃管都加入125 μL二恶英抗体溶液。混匀，室温放置60min。

2、在对应测试孔加入100 μL混合物（步骤1），用胶带盖上，通过移动酶标板来混合液体。在室温下孵育60分钟。

3、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加满微孔然后倒掉，拍板，去掉残留的洗液，重复三次，总共四次洗板。

4、每个测试孔加入100μL二恶英酶标记二抗，用胶带盖上，通过移动酶标板来混合液体。在室温下孵育30分钟。

5、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加满微孔然后倒掉，拍板，去掉残留的洗液，重复三次，总共四次洗板。

6、每个测试孔加入100μL底物显色液。通过移动酶标板来混合液体，混合30秒。在室温下孵育20min，避免阳光直射。

7、每个测试孔加入100μL终止液。

8、在加入终止液15分钟内，450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。

D. 结果分析

可以利用商业ELISA软件程序比如Logit/Log or 4-bbbbbeter 来评价ELISA结果。也可以通过计算每个标准的%B/B0值，以%B/B0为y轴、二恶英浓度为x轴作一标准曲线。样品浓度可以通过标准曲线来计算。当样品中二恶英的浓度小于2.5ppt 时即为阴性样品。当样品中二恶英的浓度大于50ppt 时要稀释后再测定。

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